实时荧光定量PCR（qPCR）技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时检测整个PCR 进程，通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。这一技术可以用于基因表达谱芯片实验后的数据验证以及中、低通量的基因表达研究，miRNA的相关研究。

沃森生物可根据客户需求及实验需要选择TaqMan探针法或SYBR Green 染料法进行qPCR检测，且检测所用试剂均为进口试剂，确保可靠数据结果。

●  使用仪器

ABI 7500 Real-Time PCR System

●服务项目

1.根据基因序列设计特异性的引物和荧光探针
    2.抽提DNA/RNA，逆转录RT-PCR及cDNA扩增
    3.Real-TimePCR(荧光定量PCR)，进行实验结果分析  

★4.特色项目

a、提供血清、石蜡组织等特殊样品miRNA qPCR技术服务

b、特殊物种（除人、大鼠及小鼠外）miRNA特异性引物设计（SYBR Green染料法）。本公司设计提供特异性的茎环引物，相较于传统的Olig-dT引物，结果准确率更高。

c、miRNA 差异性表达数据分析（包括提供t-test结果、实验步骤、扩增曲线图、溶解曲线图、差异表达分析图及原始数据）。

●结果提交

提供完整的实验报告（含定量分析结果、荧光定量扩增曲线及详细的实验步骤）及引物等实验材料

●服务说明

1.实验所需的样品：建议提供尽可能多的新鲜组织或细胞样品(包括3个技术重复)，样品量组织不少于200mg，细胞约1×107或者直接纯化好的总RNA量大于5ug或者mRNA大于200ng

2.提供尽可能详细的背景资料：DNA/RNA来源、丰度等

3.引物、探针、标准品（建议由本公司直接提供）

●案例展示

miRNA的荧光定量PCR茎环引物设计

*特异的检测引物

Fig.1. U6 snRNA (石蜡包埋组织)溶解曲线及扩增曲线

*miRNA差异表达分析

Fig.2. 不同miRNA 在Control 及Treat (石蜡包埋样品)中差异表达分析

●参考文献

1.Shenglin Huang, et al. MicroRNA-181a modulates gene expression of zinc finger family members by directly targeting their coding regions. Nucleic Acids Research, 2010, 1-8.

2.Jianhua Xiong, et al. An estrogen receptor a suppressor, microRNA-22, is downregulated in estrogen receptor a-positive human breast cancer cell lines and clinical samples. The FEBS Journal 277 (2010) ,1684–1694.