产品内容： 
提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存； 
试剂一：液体 30mL×1 瓶，4℃保存； 
试剂二：粉剂×2 瓶，4℃保存。
产品说明： 
XOD（EC1.17.3.2）催化黄嘌呤氧化生成尿酸和超氧阴离子，是活性氧主要来源之一；同时也是 核苷酸代谢的关键酶之一。XOD 主要分布于哺乳动物的心，肺，肝脏等组织中，当肝功能受损时， XOD 大量释放到血清中，对肝损害的诊断具有特异性的意义。 
XOD 催化黄嘌呤产生尿酸，尿酸在 290nm 下有特征吸收峰。
 
需自备的仪器和用品： 紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
 
 
操作步骤：
 一．粗酶液提取： 
1、 细菌、细胞或组织样品的制备： 
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）： 提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破 碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g4℃离心 10min， 取上清，置冰上待测。 
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。或者直接用 0.5mg/mL 的酶液直接测定，为保证实验准确性建议用提取液梯度稀释后测定。 
2、 血清（浆）样品：直接检测。 
 
二．操作步骤： 
1、 分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 290nm，蒸馏水调零。 
2、 XOD 检测工作液的配制：用时在每瓶试剂二中加入 15mL 试剂一，充分混匀，待用；用不完的 试剂 4℃可保存一周。 
3、 测定前按需取出一定量的 XOD 检测工作液 37℃(哺乳动物)或 25℃（其它物种）水浴 30min 以上。 
4、空白管：在 EP 管中加入 10μL 水和 250μL 工作液，立即混匀并取 200μL 转移至微量石英比色皿 或 96 孔板中，记录 290nm 下初始吸光值 A1 和 1min 后的吸光值 A2。计算ΔA 空白＝A2-A1。 
5、测定管：在 EP 管中加入 10μL 样本和 250μL 工作液，立即混匀并取 200μL 转移至微量石英比色皿或 96 孔板中，记录 290nm 下初始吸光值 A1 和 1min 后的吸光值 A2。计算ΔA 测定＝A2-A1。
三．XOD 活性计算： 
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下 
1、血清（浆）XOD 计算： 
单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟催化产生 1μmol 尿酸定义为一个酶活力单位。 
XOD（U/mL）＝[(ΔA 测定-ΔA 空白)×V 反总÷（ε×d）×106]÷V 样÷T=2.131×ΔA 
2、组织、细菌或细胞中 XOD 计算： 
（1）按样本蛋白浓度计算： 
单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1μmol 尿酸定义为一个酶活力单位。 
XOD（U/mgprot）＝[(ΔA 测定-ΔA 空白)×V 反总÷（ε×d）×106]÷(Cpr×V 样)÷T=2.131×ΔA÷Cpr 
（2）按样本鲜重计算： 
单位的定义：每 g 组织每分钟催化产生 1μmol 尿酸定义为一个酶活力单位。 
XOD（U/g 鲜重）＝[(ΔA 测定-ΔA 空白)×V 反总÷（ε×d）×106]÷（V 样÷V 样总×W）÷T=2.131×ΔA÷W 
（3）按细菌或细胞密度计算： 
单位的定义：每万个细胞每分钟催化产生 1μmol 尿酸定义为一个酶活力单位。 
XOD（U/104cell） [(ΔA 测定-ΔA 空白)×V 反总÷（ε×d）×106]÷（V 样÷V 样总×500）÷T=4.262×10-3×ΔA 
V 反总：反应体系总体积，2.6×10-4 L；ε：尿酸摩尔消光系数，1.22×104L/mol/cm；d：比色皿 光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.01mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，1min； W：样品质量，g；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；500：细胞或细菌总数，500 万。
 
b.用 96 孔板测定的计算公式如下 
1、血清（浆）XOD 计算： 
单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟催化产生 1μmol 尿酸定义为一个酶活力单位。 
XOD（U/mL）＝[(ΔA 测定-ΔA 空白)×V 反总÷（ε×d）×106]÷V 样÷T=3.552×ΔA 
2、组织、细菌或细胞中 XOD 计算： 
（1）按样本蛋白浓度计算： 
单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1μmol 尿酸定义为一个酶活力单位。 
XOD（U/mgprot）＝[(ΔA 测定-ΔA 空白)×V 反总÷（ε×d）×106]÷(Cpr×V 样)÷T=3.552×ΔA÷Cpr 
（2）按样本鲜重计算： 
单位的定义：每 g 组织每分钟催化产生 1μmol 尿酸定义为一个酶活力单位。 
XOD（U/g 鲜重）＝[(ΔA 测定-ΔA 空白)×V 反总÷（ε×d） ×106]÷（V 样÷V 样总×W） ÷T=3.552×ΔA÷W 
（3）按细菌或细胞密度计算： 
单位的定义：每万个细胞每分钟催化产生 1μmol 尿酸定义为一个酶活力单位。 
XOD（U/104cell） [(ΔA 测定-ΔA 空白)×V 反总÷（ε×d）×106]÷（V 样÷V 样总×500）÷T=7.103×10-3×ΔA 
V 反总：反应体系总体积，2.6×10-4 L；ε：尿酸摩尔消光系数，1.22×104L/mol/cm；d：96 孔板 光径，0.6cm；V 样：加入样本体积，0.01mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，1 min；W：样品质量，g；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；500：细胞或细菌总数，500 万。
 
注意： 
1、正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定，保证吸光值变化在 0.01～0.9 之间。 
2、试剂二加入试剂一后会有部分小颗粒，可以直接使用或者离心后使用，对实验结果基本无影响。