产品内容：

酸性提取液：液体25 mL×1瓶，4℃保存。

碱性提取液：液体25 mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：液体7.5mL×1瓶，4℃保存。

试剂二：液体2.5mL×1瓶，4℃保存。

试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入7.5mL蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂4℃保存。

标准品：液体1mL×1支，10μmol/mL柠檬酸标准液，4℃保存。

产品说明：

 CA是线粒体三羧酸循环的第一个中间产物，由柠檬酸合酶催化乙酰CoA与草酰乙酸合成，其含量是三羧酸循环强度的主要指标之一。

    CA在柠檬酸裂解酶的作用下，生成α-酮酸（草酰乙酸）；在弱酸性条件下，α-酮酸进一步与苯肼反应，生成相应的α-酮酸苯腙；α-酮酸苯腙在330nm处有吸收峰，该波长下吸光度的变化程度可反应出CA的含量。

试验中所需的仪器和试剂：

紫外分光光度计、水浴锅、可调式移液枪、1mL石英比色皿、研钵和蒸馏水。

操作步骤：

一、线粒体中柠檬酸提取：

1. 称约0.05-0.1g组织（建议称0.1g样本），加入0.5mL酸性提取液，冰上充分研磨，600g/min 4℃离心5min，取上清至另一EP管中，11000g/min 4℃离心10min，弃上清（取300μL该上清液和300μL碱性提取液中和后可用于细胞质CA含量测定）；沉淀即线粒体，向沉淀中加入0.5mL酸性提取液，充分悬浮溶解，超声波破碎（功率20%，超声3秒，间隔10秒，重复30次），取此溶液300μL和300μL碱性提取液中和，混匀，置冰上待测（不可用于蛋白质含量测定）。

二、测定：

1. 紫外分光光度计预热30 min以上，调节波长到330nm，蒸馏水调零。

2. 试剂一、二和三置于37℃预热10min。

相关文献：

《Intracellular citrate accumulation by oxidized ATM-mediated metabolism reprogramming via PFKP and CS enhances hypoxic breast cancer cell invasion and metastasis》 作者:Meixi Peng, Dan Yang, Yixuan Hou, Shuiqing Liu, Maojia Zhao, Yilu Qin, Rui Chen, Yong Teng & Manran Liu 期刊:Cell Death and Disease 影响因子:5.959 PMID:30850587