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miRNA载体构建及病毒包装
实验原理
miRNA是在真核生物中发现的具有调控功能的内源性非编码RNA，大小约20~25个核苷酸。我们根据成熟miRNA序列信息，合成含有茎环结构的前体miRNA连接至含侧翼序列的表达载体中，将其转染/病毒包装感染进入细胞后，由II型启动子（CMV）启动表达，经核酸酶的剪切加工，组装RNA诱导的沉默复合体，通过碱基互补配对的方式识别靶mRNA，并根据互补程度的不同指导沉默复合体降解靶mRNA或者阻遏靶mRNA的翻译。
实验流程
miRNA的qPCR检测
实验原理
通过qPCR准确进行miRNA在细胞或组织样本中的表达分析是研究miRNA功能的基础。将小片段的miRNA通过聚合酶A加尾，再通过含有通用序列的Oligo序列进行反转录，合成特异性的miRNA引物及通用引物即可对miRNA进行qPCR检测工作。
实验流程
miRNA靶点筛选
实验原理
miRNA通过碱基配对结合到靶mRNA的3’UTR区，抑制靶基因的翻译或对靶基因mRNA的降解达到调控基因表达的目的。将靶mRNA的3’UTR区构建至萤火虫荧光素酶报告基因的3’端，与miRNA表达载体及海肾荧光素酶报告基因载体共转染细胞，先后加入两种底物荧光素，通过对荧光素酶报告基因的表达检测确认miRNA对靶基因的调控效果。
实验流程
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