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具有全新成像模块和目标识别软件的多功能微孔板检测系统-Molecular Devices

作者：美谷分子仪器（上海）有限公司 2015-08-03T00:00 (访问量:2819)

具有全新成像模块和目标识别软件的多功能微孔板检测系统-Molecular Devices

摘要

当需获得高质量、多种参数的数据时，我们需要一种能够进行复杂的基于细胞学检测的仪器来提高数据获取速度。这里我们通过一系列基于细胞学检测的结果，来介绍一款将细胞成像系统和多功能微孔板检测系统整合于一体的仪器，它即能够提高检测的通量，也能够增加检测数据的丰富度。此仪器即为Molecular Devices公司最新推出的SpectraMax® MiniMax™ 300，其标配有一个白色透射光通道和两个荧光检测通道。其**的免染料标记的细胞检测技术，可通过其白色透射光通道对微孔板内没有标记的细胞进行精确计数，帮助分析细胞增殖、分化和化合物对细胞的毒性影响等情况。其标配的两个荧光通道大大提高了此仪器的检测范围，包括检测细胞增殖、转染效率、细胞活力/细胞凋亡、细胞分化或者细胞周期。分析软件中使用了全新的逻辑运算方式来识别细胞，可以简化分析过程并且可输出更多种参数数据：细胞数目、细胞汇合度、平均和完整的细胞面积、平均和完整的荧光信号强度。我们列举了几种基于细胞动力学检测的实例。我们展示了如何利用全新的细胞成像系统来更好的服务于生物学的研究，基于此平台的基础上发展了几种即适合生物制药企业也适合研究中心的检测方法。

SpectraMax® MiniMax™ 300细胞成像系统

· 可结合SpectraMax® I3多功能微孔板检测系统；

· 荧光&透射光模块；

· 简便的操作来源于其全自动化设计

· 专有固态照明

· 高灵敏度的CCD相机

· 专有的激光自动聚焦方式

· 优异均一性&对比度

· 专业的SoftMax® Pro软件

方法：

肝细胞毒性试验

根据Protocol要求将Hela细胞种在96孔板中(4000 cell/well)，使用抗癌化合物处理细胞48小时以后，用MinMax成像系统的透射光通道获取细胞图像，并且在无需染料的情况下，仅通过软件的逻辑运算功能就可以对细胞进行计数或得出细胞覆盖面积的百分比。使用SoftMax6.4软件直接获得IC50值，可在不同时间点进行数据的采集。

肝细胞毒性试验

使用来自于Cellular Dynamics International(CDI)公司的由ipsc(诱导多功能干细胞)分化的肝细胞，按照其要求种在微孔板中。使用胶原包被的9 6 孔板，其中细胞密度为60000 cell/well，或者使用胶原包被的384孔板，其中细胞密度为15000 cell/well，培养2-3天，然后用相应化合物刺激细胞72小时。使用Calcein(活细胞检测试剂盒，Invitrogen)或者使用鬼笔环肽共轭连接的AF488(固定细胞，BD试剂盒)染料对细胞进行染色，使用MinMax成像系统获得图像后，利用软件逻辑运算功能分析细胞的增殖情况。

造血干细胞的分化&毒性

将造血干细胞(CD34+细胞，Lonza)种在96孔板中，然后加入细胞因子指示剂和抗癌药物后培养5天。使用Cell Tracker Green(Invitrogen)或抗血型糖蛋白A(anti-Glycophorin A)(BD试剂盒)。成像后的细胞，使用软件自带模块来分析细胞的数目。

成像模式下简化细胞计数

全新的SpectraMax MinMax 300成像系统可以帮助用户按照自己的需要轻松设置试验，然后快速进行检测。此系统具有强大的获取、分析图像的功能，得益于图像分析行业领导软件MetaMorph，我们将其核心分析功能整合进了SoftMax Pro软件中。用户可以根据自己特定试验的需求从若干个应用模版中进行选择，再去获取和分析图像。

透射光成像时可根据细胞形态对细胞进行分割

透射光成像功能对于基于细胞学检测的试验非常具有吸引力，原因在于其无需标记，且仅需要较短的曝光时间，不同时间点都可以检测且对细胞无损伤。然而，在透射光条件下对许多连接紧密的细胞进行分割是一个非常大的挑战，因为细胞与背景的对比度很低，这样就需要软件具有强大的逻辑运算能力。这里，我们介绍具有**的无标记细胞检测技术，通过仪器的学习能力简化图像的分析设置，它可以适用于很多不同种类的细胞。

基于细胞学检测试验

细胞增殖/毒性，通过癌细胞(HeLa)增殖情况来评价抗癌药物的疗效

透射光条件下的无标记细胞计数功能，进行细胞增殖试验可在不同时间点获得结果。使得可以选择不同时间点记录抗增殖药物或者生长因子对细胞的作用效果，绘出浓度效应学曲线并给出IC₅₀s值，而且重要的是整个过程不需要染细胞进行观察，试验过程并不会影响细胞正常变化。

使用ipsc(诱导多功能干细胞)分化的肝细胞进行肝细胞毒性分析试验

肝细胞毒性分析试验使用诱导多功能干细胞(ipsc)分化的肝细胞作为研究对象。使用若干种肝毒性药物对这些细胞处理72小时后，我们使用Calecin或者鬼笔环肽偶联的AF-488评价细胞的活力，毒性检测的评价方法可以根据细胞区域面积变化或细胞数目的变化，黄曲霉毒素、十字袍碱、依托泊苷和其他肝毒性化合物的IC₅₀s值的确定，检测试验的窗口大约为200，Z值＞0.9。

造血干细胞分化&毒性

我们设计出一个非常适合检测生长因子和抗癌药物对造血作用影响的试验，我们将造血干细胞中加入不同的生长因子进行培养，此外，可以用来评价几种抗癌药物的作用效果，使用标记有FITC细胞系特异性的抗体进行染色或者使用细胞示踪绿色染料(Cell Tracker Green)。可以用于检测许多表达谱系特异性标记物的细胞或全部细胞数目，IC₅₀s由不同因素所决定。试验窗口(assay window)＞100，Z值＞0.7。