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双链特异性直接消化cDNA削减试剂盒

作者:上海贝基生物科技有限公司 2008-05-05T00:00 (访问量:4544)

DsDD cDNA Subtraction Kit Wako双链特异性直接消化cDNA削减试剂盒

Simple and quick enrichment of specifically expressed genes 

TIBCO减法杂交法是一种利用组织特异性显现,鉴定基因的有效方法之一。迄今为止有各种各样不同的方法被提出,然而,无论哪种方法的操作都较为烦杂且作业工序多,需要时间和高技术。而且,cDNA Library 不能用于作为启发材料,因而每次都不得不用mRNA准备TesterDriver cDNA

DsDDDuplex-specific Direct DigestioncDNA Subtraction Kit Wako 是以cDNA library 的调制为基础,运用减去法调制Tester Driver cDNA。再利用TestercDNA 显现组织的非特异性,形成高品质的基因同伴。在二条链的特异性DNA核酸酶存在的情况下,利用Duplex-specific nuclease,分解杂化的DNA。之后,利用ExonucleaseⅠ 分解除去在Tester cDNA中特异显现的残留Drive cDNA,以实现cDNA高效浓缩。

在解析癌细胞组织特异性机能和性质时,Tester cDNA 由癌细胞组织调制,Driver cDNA由正常细胞组织调制,浓缩来自基因的cDNA,可显现癌细胞组织的特异性。DsDD cDNA Subtraction Kit Wako中的cDNA Library 可用于作为起动材料,此方法的全部工序可在2天完成,是划时代的技术。

【试剂盒内容】

 Lambda Exonuclease

5µl X 1

 10 X Lambda Exonuclease Buffer

25µl X 1

 4 X Hybridization Buffer

25µl X 1

 Duplex—specific nuclease

5µl X 1

 2 X Duplex-specific nuclease Buffer

25µl X 1

 ExonucleaseⅠ

5µl X 1

 10 X Exonuclease I Buffer

25µl X 1

 Ethachinmate

50µl X 1

 Stop Solution

50µl X 1

 3mol/Sodium Acetate, PH5.2

200µl X 1

 使用手册

1

【试剂盒原理】

注意Tester cDNA LibraryDriver cDNA Library

对于cDNA媒介物,Tester使用同一方向插入的cDNA Library

1.        Tester Library(异常)→DNA放大Library 放大的Tester dsDNA.

  Driver Library(正常)→DNA放大Library 放大的Diver dsDNA.

2.        Tester DNA的调制:

         使用仅一侧磷酸化的cDNA程序库,用启发剂进行DNA放大,经Lambda Exonuclease 处理,调制出1条链cDNA

1   Tester cDNA放大。

DNA放大时,对附带磷酸的末端使用启发剂。

2    Lambda Exonuclease 处理。

识别2条链DNA磷酸末端,由5ˊ→3ˊ方向分解。如果无法形成高品质的Tester同伴,可适当提高减去法效率。 

3.        Driver DNA的调制:

      使用cDNA程序库进行DNA放大,将multi-Croning两侧的部分部位用限制酶处理。

3)制限酶处理:

除去两端的接合部分,以防止杂交时的差错及杂化。 

4.        杂交:

Tester cDNADriver cDNA68℃情况下反应16--20小时。(混合比为1200)过量的Driver cDNA与除特异性基因以外的Tester cDNA大部分形成dsDNA

4)热变性后,Tester ss cDNA Driver ds cDNA不进行杂交。

5.        DSN处理:

利用DSN作用于2条链的特异性,分解除去杂化形成的2条链cDNA

5)进行高特异性反应,其反应温度高于68℃

6.        DNA放大

7.        Exonuclease I 处理

利用Exonuclease I 分解除去未形成杂化的残留Driver ss cDNA。使用酶切断特异性1条链DNA。除特异性基因以外的一条链状态全部分解。自实验开始起2天内,即可得到高效率的Subtracted cDNA

产品编号

品名

容量

294-62001

DsDD cDNA Subtraction kit Wako

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