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细胞污染全攻略(含防、治妙招)

作者:翌圣生物科技(上海)股份有限公司 2020-07-30T00:00 (访问量:8647)

 细胞污染全攻略(含防、治妙招)

我擦……

细胞又污染了!

咋整,快崩溃了!!

Who can help me! !!                         

君莫急,小翊来帮您!

专治各种细胞疑难杂症,

小翊送你完整攻略。

攻略一:了解细胞污染 

古人云:知己知彼方可百战百胜,因此了解细胞污染是非常重要的。常见的污染类型细菌污染、真菌污染、支原体污染、原虫污染、黑胶虫污染、病毒污染以及非同种细胞污染。

      1、细菌细菌在普通倒置显微镜高倍镜大多可见,根据感染细菌种类不同,呈现不同的外形。其培养基一般会浑浊变黄较快,对细胞生长状态影响明显。

 

1细胞受到细菌污染图

        2真菌真菌污染在显微镜下可以看到丝状物,有些真菌开始很像死细胞碎片,珊瑚状,随时间转移会长出黑色丝状物。真菌生长的比较慢,一般培养基清亮,不变色,不细菌易被发现一旦发现有它的存在,细胞污染就比较严重了,也很难救活。

 

  

2细胞受到真菌污染图

 

 

         3、支原体细菌和真菌造成的污染相对容易发现,然而支原体造成的污染很难察觉,即使生长密度高达 107-109CFU/ml,也很难有污染迹象(浑浊、pH变化等)。支原体污染后导致细胞生长变慢,状态变差,不会马上使细胞致死,但会影响细胞内的各种参数,如改变细胞新陈代谢,改变DNA转染效率。支原体感染细胞以后,细胞病变不明显,只是慢慢死去。

 

  

3细胞受到支原体污染图

  

      

         4、黑胶虫*一般低倍镜下观察呈黑色点状,高倍下可看见黑色物蠕动,培养液不易变浑浊,在细胞增殖旺盛之后会减少或消失。有时也会出现观测到的运动物明显增多,细胞状态变差,最终死亡*对于黑胶虫没有明确的定论,通常认为黑色物是由于多种原因导致细胞状态变差、死亡细胞产生的碎片

 

  

4细胞受到黑胶虫污染图

      5原虫*该污染在显微镜下易观察到,轻微活动,细胞生长但繁殖速度明显减慢,培养基产生浑浊,细胞状态,边缘不清楚,细胞不透亮。其能与细胞共生争夺培养基营养当到达一定的数量时就会影响到细胞的生长,导致细胞死亡*对于原虫污染倾向于是细菌类污染

  

5细胞受到原虫污染图

      6病毒由于病毒过小导致培养过程中难以观察。由于在获得原代细胞过程中没有完全除去潜在的病毒,导致病毒污染。尽管病毒污染细胞原代培养不会造成太大影响,但对下游工业生产如生产疫苗等造成安全隐患,因此需要尽量去除。

 

 6:病毒入侵猴肝脏细胞层图像(图 源自悉尼大学)

       7非同种细胞污染 这个主要指不同种类细胞产生的交叉污染,由于细胞培养过程中不同种类细胞株所需器材和溶液没有严格分开,导致细胞交叉污染。据报道,世界上已有种细胞都被HeLa细胞所污染,致使许多实验宣告无效,因此避免非同种细胞污染也需要引起实验者的重视。

        

 

7细胞受到非同种细胞污染图

 

 

攻略二:污染的去除

细胞培养过程中难免会遇到细胞污染,怎么办???

 多数污染是难完全去除,如果污染细胞非珍贵且有备用,舍弃;

 找到污染源后并清除掉,可复苏冻存细胞或重新购置细胞培养

 若污染细胞很珍贵一时难觅新,针对不同污染小翊给您如下建议

 

 

 

攻略三:污染的预防

  细胞污染是比较难处理,因此预防就显的尤为重要。对于预防可从以下几方面着手:

1、 使用抗生素对细胞培养基使用双抗(在细胞培养基中推荐青霉素的工作浓度为100U/ml,链霉素为0.1mg/ml。

2、 支原体预防:可以使用支原体预防试剂预防支原体的污染产生。

3、培养器材、用品需消毒灭菌细胞培养所用器材要清洗消毒,各种溶液灭菌处理

4、实验操作者的无菌意识

  洗手消毒,穿隔离衣。工作开始时要用酒精棉球擦手并对器皿进行酒精擦拭

  操作需在生物安全柜内并佩戴口罩;

  ③尽量使用一次性无菌器材操作,对于多次使用的需高压灭菌处理。实验完毕用酒精擦拭操作台面。

5、细胞交叉污染的预防

  ①一次对多种细胞培养操作时,所用器具要严格区分

  在进行换液或传代操作时尽量避免液体溅出污染其他细胞

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