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单克隆抗体制备之噬菌体展示技术

作者:北京义翘神州科技有限公司 2020-08-19T18:54 (访问量:7485)


1. 噬菌体展示技术的原理

噬菌体展示技术是将外源编码多肽或蛋白质的基因通过基因工程技术插入到噬菌体外壳蛋白结构基因的适当位置,在阅读框能正确表达,使外源多肽或蛋白在噬菌体的衣壳蛋白上形成融合蛋白,随子代噬菌体的重新组装呈现在噬菌体表面,可以保持相对的空间结构和生物活性。

然后利用靶分子,采用合适的淘洗方法,洗去未特异性结合的噬菌体。再用酸碱或者竞争的分子洗脱下结合的噬菌体,中和后的噬菌体感染大肠杆菌扩增,经过3-5轮的富集,逐步提高可以特异性识别靶分子的噬菌体比例,最终获得识别靶分子的多肽或者蛋白。

2. 噬菌体展示技术的分类

噬菌体展示技术有多种分类标准。根据噬菌体的不同,可以分为M13T7T4、λ等多种体系;根据载体的不同,可以分为噬菌体载体和噬菌粒载体;根据文库的不同,可以分为随机肽库、cDNA文库、抗体文库、蛋白质文库等。

噬菌体展示技术构建抗体库省去细胞融合步骤,避免了因杂交瘤不稳定而反复亚克隆的繁琐程序,极大的提高库容量,从杂交瘤的几千个克隆升至106个。噬菌体展示技术可以直接得到抗体基因,便于进一步构建各种基因工程抗体,还可用于一些难于制备的抗体,如弱免疫原、毒性抗原等,以及人源化抗体。由于噬菌体展示技术周期短,在细菌中增值,因此适用于抗体的大规模工业化生产。

利用噬菌体展示技术,可以筛选出与抗体特异性结果的噬菌体,获得该抗体识别的抗原表位,进行抗原表位分析,为研究抗原抗体反应机制、诊断试剂开发、疫苗制备等提供依据。

单抗药物需要抗体人源化,并且药物靶点趋于多样化,比如常见的细胞因子药物,有些可以识别多个抗原表位,因此需要利用噬菌体抗体库进行研究,才能开发出科技含量高、市场竞争力高、治疗效果好的单抗药物。

双特异性抗体药物已经成为目前药物开发的主要方向。双特异抗体是通过基因工程技术将两个分别靶向不同抗原的抗体片段组合在一起,使其具有两种抗原结合位点,发挥协同作用,提高治疗效果。由于双特异抗体种类繁多,噬菌体抗体库能有效的提高开发效率。

当然,噬菌体抗体库技术也存在一些不足,有许多方面需要改进,如提高抗体库的库容及多样性,优化筛选方法获得高亲和力的抗体,克服淘选过程中的阳性克隆丢失及假阳性克隆。随着蛋白质组学、分子模拟技术等的发展完善,将会推进噬菌体抗体库构建技术及其在蛋白质学研究、药物研发、疫苗研制等领域的发展。

义翘神州为生物公司和研究机构提供完全定制化的单克隆抗体制备服务,可按照客户最终应用要求制定个性化免疫、筛选及检测方案等。针对多肽免疫,我们拥有专业高效的多肽设计软件及高效偶联方法,保证95% 以上的成功率。生产的抗体可用于临床前体外和体内实验,生产规模从毫克到100克不等。

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